HILIC親水液相色譜柱親水作用色譜是一種直接分離極性和親水性化合物的色譜技術,它以親水性的填料作為固定相,以水、有機溶劑和緩沖液作為流動相洗脫劑。在HILIC方法中,洗脫順序和反相色譜正好相反,即極性越大,保留時間越長。
HILIC親水液相色譜柱的結構:
a、空柱由柱接頭、柱管及濾片組裝而成。
柱接頭采用低死體積結構,柱接頭是兩端螺紋組件。在兩端柱接頭內,柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片(或濾網),用于封堵柱填料不被流動相沖出柱外而流失。空柱各組件均為316#不銹鋼材質,能耐受一般的溶劑作用。但由于含氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性,故使用時要注意,柱及連接管內不能長時間存留此類溶劑,以避免腐蝕。
b、柱填料:
液相色譜柱的分離作用是在填料與流動相之間進行的,柱子的分類是依據填料類型而定。
正相柱:多以硅膠為柱填料。根據外型可分為無定型和球型兩種,其顆粒直徑在3—10 µm的范圍內。另一類正相填料是硅膠表面鍵合—CN,-NH2等官能團即所謂的鍵合相硅膠。
反相柱:主要是以硅膠為基質,在其表面鍵合十八烷基官能團(ODS)的非極性填料。也有無定型和球型之分。
常用的其他的反相填料還有鍵合C8、C4、C2、苯基等,其顆粒的粒徑在3—10 µm之間。
HILIC親水液相色譜柱的安裝:
a、拆開柱包裝盒,確認色譜柱的類型、尺寸、出廠日期以及柱內貯存的溶劑。
b、擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用。
c、按柱管上標示的流動相流向,將色譜柱的入口端通過連接管與進樣閥出口相連接(如條件允許,建議在柱前使用保護柱);柱的出口與檢測器連接。連接管是外徑為1.57mm、內徑為0.1-0.3mm的不銹鋼管。連接管的兩端均有空心螺釘及密封用壓環。在接管時一定要設法降低柱外死體積。連接管通過空心螺釘、壓環后盡量用力插到底,然后順時針擰緊空心螺釘,直到擰不動為止,再用扳手繼續順時針擰1/4-1/2圈,切記不要用力過大。如色譜柱通過流動相加壓后有漏液現象,請用扳手繼續順時針擰1/4圈,直至不漏液為止。壓環被空心螺釘擠壓變形后緊箍在連接管上(連接管通過壓環后露出的管長度應嚴格控制在2.5mm長或其他固定尺寸)。