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正相?反相?手性分离模式如何选择?

更新时间:2023-09-12 点击次数:1066

哈喽,小伙伴们,还记得上个世纪五、六十年代震惊世界的“反应停事件"吗?反应停学名为沙利度胺Thalidomide,结构见下图,其消旋体曾被用作缓解妊娠反应的药物。但是后来才发现其中的R-型异构体才是有效的抗呕吐成分,可减轻妊娠e心、呕吐等症状;而S-型异构体则会导致婴儿畸形,结果当时在西德、荷兰和日本等地区产生了大批的畸形儿。


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随着生物工程和生命科学的发展,科学家已经认识到,手性化合物例如手性药物异构体尽管其物理和化学性质几乎wan全相同,只有旋光性不同,但它们在生物体内的生理活性和药理作用却存在很大的差别。为此,制药行业中,必须对有效成分的对映体进行拆分,而不能将其混合物作为药物出售。 

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采用液相色谱法分离手性化合物,是目前shou选方法之一,要考虑手性柱的固定相类型、分离模式及流动相溶剂。现在市面上手性固定相类型较多,手性色谱有正相分离和反相分离两种模式,流动相溶剂的选择与固定相、样品性质、分离模式有关。今天,小编就和大家聊聊,如何选择合适的手性分离模式。


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正相分离模式

当样品溶于非极性溶剂中,选择正相分离模式。常用的流动相组合是烷烃类和醇类。其中,醇类起到了洗脱作用,烷烃类用来调节流动相的洗脱强度。

烷烃类试剂,可选择正己烷、正戊烷、异己烷、正庚烷,它们对样品分离没有太大影响,不会改变选择性和分离度,选择正己烷较多。

流动相中的醇类,对目标物的分离起关键作用,不同的醇有不同的选择性,且随着流动相中醇类的比例提高,目标峰的保留时间缩短。zui常用的醇类是乙醇和异丙醇,它们的洗脱能力是:乙醇>异丙醇。甲醇在烷烃中的溶解性不好,正己烷中甲醇的最大含量是5%。如果要在烷烃中加入甲醇,最好同时加入一定量的乙醇,提高流动相的溶解性。

在手性色谱中,为改善目标物的峰形,需要在流动相中添加酸或者碱。如果目标物是酸性化合物,往往要在流动相中加入酸性添加剂,如三氟yi酸、乙酸、甲酸等。如果目标物是碱性化合物,要在流动相中加入碱性添加剂,如二乙胺、三乙胺、丁胺、乙醇胺等。酸性或碱性添加剂的加入量一般为0.1%~0.3%,最大不超过0.5%,要注意色谱柱的pH耐受范围。


需要注意的是:

1、正相色谱柱安装前,必须先用合适的流动相冲洗整个仪器管路,包括进样器。有些试剂(如丙酮、氯仿、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亚砜、乙酸乙酯、二氯甲烷、THF)会破坏手性固定相的结构,请不要使用这些溶剂作为流动相的组成部分,或者作为样品稀释剂。如果有无法确定的,请咨询厂家。

2、色谱柱能使用纯甲醇或者纯乙腈作为流动相,如果要将正己烷换成甲醇或者乙腈,或者换成其他极性溶剂,需要用纯异丙醇作为溶剂充分过渡。

3、正相手性柱应避开含水的流动相。

应用案例

溴甲ji苯异丙酸消旋体的测定

液相条件

色谱柱:Ultimate® Cellu-J(4.6×250mm,5μm)  。 

流动相:正己烷:乙醇:三氟yi酸(90:10:0.1);

检测波长:220nm;

柱温:25℃;

流速:1mL/min;

进样量:10μL;

样品配置:1mg/mL,乙醇/正己烷(1/1)溶解。

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反相分离模式

如果样品溶于含水极性溶剂时,选择反相分离模式。常用的流动相组合是有机相和水相。其中,水相用来调节流动相的洗脱强度,常用的水相可以是磷酸盐缓冲液,或者是纯水。有机相起到了洗脱作用,常用的有机相是乙腈、甲醇、乙醇、异丙醇等,且有机相比例越高,目标物的保留时间越短。

应用案例

盐酸达泊xi汀的测定

液相条件

色谱柱:Ultimate® Cellu-JR(4.6×250mm,5μm)  。 

流动相:甲醇:乙醇:二乙胺(95:5:0.1)

检测波长:220nm;

柱温:20℃;

流速:0.6mL/min;

进样量:5μL;

样品配置:1mg/mL,甲醇溶解

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目前,月旭科技的手性固定相填料包括 Cellu-D、Cellu-J、Amy-D等,可以满足绝大多数手性样品分离需求。各位小伙伴有手性样品分离或需要筛选柱子,欢迎联系月旭售前技术热线或当地销售。

月旭科技手性色谱柱订货信息




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