不少做色谱分离试验的人遇到过这样的情形：不慎未及时补充流动相，泵将溶剂瓶中的流动相吸干了，HPLC系统由此而停止工作了。如此情况是否会损坏色谱柱？泵是否已将色谱柱中所有流动相都排干了？色谱柱还能使用吗？事实上，如果泵将溶剂瓶中的流动相吸干，并不会造成色谱柱的损坏。即使泵中充满了空气，泵也不会将空气排入色谱柱。因为泵只能输送液体，而不能输送空气。

相比之下，另一个更可能发生的情况是忘记盖上色谱柱两端的密封盖或盖子太松而使色谱柱变干。同样，整个色谱柱干涸的情况不太容易发生，多半可能只是色谱柱两端的几个毫米变干了，因挥发掉所有溶剂是色谱柱变干需要相当长的时间。即使色谱柱真的变干了，也不一定就不可救药了。可以尝试用一种*脱气的、表面张力低的溶剂（如甲醇）冲洗色谱柱以除去气体。较低的表面张力有助于浸润填料表面；已脱气的溶剂应该能够溶解并去除滞留在填料中的气体。色谱柱大约需要（以1mL/min的流速）冲一个小时或更多的时间被*浸润，恢复到正常状态。

颗粒： 颗粒可以损坏泵和注射器。颗粒也可以堵塞色谱柱并且熔化它，这会导致回压增大。颗粒还会表现为另一种固相，可能改变样品的组分。

有机物：超纯水中的有机物可能影响色谱峰的分离度和积分、可能导致鬼峰、还可能改变固定相的选测性以及影响色谱基线。

离子：离子浓度的改变会影响分离结果，部分能吸收UV的离子会对峰产生影响。某些有腐蚀性离子的还会降低高压输液泵等配件的使用寿命。

胶体：胶体会不可逆的吸附在固定相上面，影响柱的分离效果。

微生物：微生物会堵塞色谱柱，其代谢产物会增加有机物，颗粒等污染物。

瓶装纯净水和蒸馏水：目前部分HPLC分析中使用的纯净水，由于瓶装纯净水和蒸馏水均只是普通纯水而不是超纯水，水中仍含有少量离子和有机物等杂质，用以配制液相和洗脱液不仅可能污堵昂贵的色谱柱，也影响HPLC定出平坦的基线。

瓶装纯净水的纯化工艺：通常包括吸附、过滤、反渗透等，对颗粒性有机物的去除效果较好，但对微量离子及有机物的去除却不能满足高灵敏度的HPLC实验之需求，并且，由于其包装通常多为PVC瓶，透氧率高，同时存在一定的化学溶出量，从而污染瓶中的纯净水，尤其是保存一段时间后，水质下降更多，因此表现在HPLC色谱图上，虽无特定吸收峰，但基线存在较严重的不稳干扰。

蒸馏水：是指用蒸馏方法制备的纯水。可分一次和多次蒸馏水。水经过一次蒸馏，不挥发的组分残留在容器中被除去，挥发的组分进入蒸馏水的初始馏分中，通常只收集馏分的中间部分，约占60％，要得到更纯的水，可在一次蒸馏水中加入碱性高锰酸钾溶液，除去有机物和二氧化碳；加入非挥发性的酸（硫酸或磷酸），使氨成为不挥发的铵盐。通过对双蒸水进行HPLC检测时发现，254nm和214nm在22～27分钟时都出现较强的吸收峰，这表明有疏水性较强的有机物污染，其原因应是蒸馏过程的共沸现象导致了某些挥发性有机物去除不*。

超纯水机：综合了反渗透、离子交换、活性炭吸附、膜过滤、超滤及紫外光氧化等多种纯化工艺，产水电导率达到18.2MΩ•cm，产水水质超过国标一级水标准且稳定可测，超纯水即取即用，不会因储存引入污染，水质有保证，较之使用瓶装纯净水或蒸馏水，更能满足用户高精度仪器分析的需要。

很多实验人员在使用保护柱的时候出现峰形分叉压力升高超出仪器报警限才考虑更换保护柱，长期检测样品，长时间未更换保护柱而造成分析柱出现污染，故需要即使根据使用情况来更换保护柱。

保护柱的更换频率通常根据经验而定，按照每个方法/样品类型综合考虑，但是许多分析人员会在完成一定数量的样品分析或测试一些柱的性能指标（例如增加10%峰展宽或拖尾因子，或降低10%的柱效（塔板数））后更换保护柱。

保护柱上的漏液使用保护柱时通常有两个地方可能漏液，一个是接头的地方，另一个位置是保护柱中间的缝隙；接头的地方漏液，参照上述的流程处理。中间的地方漏液有两种可能，一种是保护柱芯可能没有放到底，因为运输过程中有可能使保护柱柱芯两端的peek稍有变形，只要仔细一点放进去就好；另一种是由于卡套是手紧式的，表面有手紧时用的纹路，有些客户认为只要用手拧紧就可以了，但事实上仅仅通过用手来拧紧是不够的，需要用扳手来稍紧一下，大约手紧后需用扳手继续拧30～45度角即可。

1、一个新的保护柱芯是没有方向的从第一次使用时开始保护柱芯就赋予了方向，因为固体颗粒物质和强保留物质总是从入口端到达保护柱，并在这一端开始累积。所以柱芯在开始使用后应确认好方向。

2、当发现分析过程出现柱压太高、柱效下降或分离度下降等影响分离的因素的时候，需要对保护柱进行一下维护。维护的方法如下：

通常色谱柱压力异常升高和泵密封圈应定期更换。建议每个液相色谱仪用户建立一个泵密封圈更换的定期检修计划。这应根据泵的使用和流动相组成情况而定。由于它们易磨损的特点，盐缓冲大大加速密封圈和活塞的磨损。在活塞下面的泵头上检测到泄漏时，保留时间不稳定时，或系统压力不稳定时，都应更换密封圈。请按照以下程序更换所维护的泵的密封圈。

柱头塌陷：是指色谱柱使用较长的一段时间后，由于填料中硅胶基质或键合相的流失，导致柱床松动，在单向压力的作用下（色谱柱入口端承受绝大部分系统压力而出口端压力很小），整体表现为色谱柱的入口端出现填料缺失，严重时可看到填料的缺口。

相塌陷：是指常规C18柱长时间用高含水量的流动相（>90％）长时间冲洗后，导致保留时间逐渐变短，最后可能在色谱柱上一点保留也没有的现象。

柱头塌陷：通常在色谱图上表现出柱效下降、峰形严重后拖，有时候也会出现严重前拖。造成柱头塌陷的原因，主要是由流动相和样品引起的，1.0mL/min的流速，如果pH超标或在色谱柱pH耐受范围临界点附近长时间使用，是比较容易造成柱头塌陷的，此外，硅胶基质的溶解规律是流动pH值控制范围是2～8，超出范围就会造成色谱柱出现严重的破坏。建议避免使用高浓度缓冲盐，或者高比例纯水相，或者使用耐受强酸性或者强碱性色谱柱，以保证色谱柱具有好的耐受性。

相塌陷：色谱柱出现了相塌陷后，通常用纯乙腈或甲醇持续冲洗可以使出现相塌陷的色谱柱恢复到原来的状态，*恢复需要比较长的时间，通常30分钟到1个小时。