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液相小贴士:示差折光检测器篇

更新时间:2021-12-09 点击次数:24303

小伙伴们大家好,上一次液相维护小贴士的系列文章中,我们聊过了紫外检测器,今天我们来说一说示差折光检测器。

示差折光检测器(Refractive Index Detector, RID)属于中等灵敏度浓度型检测器,其响应值取决于柱后流出液折射率的变化,采用含有样品的流出液与不含样品的流出液的折射率的示差而测定。由于每种物质都有各自的折射率,因此示差折光检测器对所有物质都有响应,是一种通用型检测器,具有广泛的适用范围。


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 示差折光检测器的原理


微信截图_20211209105313.png

RID是一种偏转式或者斯涅尔式折射率检测器。斯涅尔定律指出,平行光束沿着一个大于零的入射角通过一个将两种具有不同折射率的介质分开的电介质界面时,其折射率将与两种介质的折射率差幅成函数关系。


2

示差折光检测器的结构


微信截图_20211209105343.png

1、钨灯 2、聚光透镜 3、狭缝 4、准直镜 

   5、狭缝 6、检测池 7、反光镜 8、零位玻璃 9、光敏接收元件


低功率、长寿命的钨灯发射出的光线经过准直透镜和狭缝后,通过参比池(参照池)和样品池(样本池),经平面镜反射回来后,再次通过光学单元,最后通过透镜聚焦到一对光传感二极管上(光传感器)。在测试期间,参比池和样品池中充满流动相。参比池随后与流路隔开,流动相仅流过样品池。如果两个池中介质的折射率没有差异,光线在通过它们时将不会发生折射。


微信截图_20211209105412.png

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光束

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样本池

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参照池

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光轴(Ns>Nr)

5

光轴(Ns=Nr)

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Distance between...(4)和(5)在光传感器处的间距

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光传感器


Ns:样本池中流动相的折射率

Nr:参照池中流动相的折射率


光线照射到一对光电二极管上,其中每个光电二极管都将给出一个电信号。随后这些信号会被放大,从而测得两个信号之间的差异。如果是零折射,这些信号之间的差异应该为零伏。借助一个电控机械联动装置,用户可以通过光路中的折射透镜来优化光电二极管的零偏转输出。还可以通过额外电路轻松地将信号输出校正为电子零点。


微信截图_20211209105439.png

1

光传感器A

2

光传感器B

3

光束


当流动相的折射率发生变化时,通过样品池和参比池之间界面的光将被折射,从而使一个光电二极管上的光强增大,另一个电二极管上的光强减小。这种差异产生具有振幅和极性的信号,此信号被放大后,可以驱动图表记录仪。

3

示差折光检测器的应用范围

示差折光检测器是一种通用型检测器,只要被测组分与洗脱液的折光指数有差别就可使用。生命科学中常遇到各类糖类化合物,没有紫外吸收,一般常用示差折光检测器,她的通用性比UVD广,但灵敏度要低,对温度变化敏感,并与梯度洗脱不相容,因而限制了它的使用。

应用一:麦芽糖、果糖、葡萄糖、异麦芽糖、麦芽三糖

色谱条件

色谱柱:月旭Xtimate® NH2(4.6×300,5μm)。

流动相:乙腈:水=75:25;

检测器:RID;

柱温:30℃;

流速:1.0ml/min;

进样量:50μL。

色谱图



微信截图_20211209105516.png

应用二:磷酸果糖二钠、蔗糖、葡萄糖、果糖


色谱条件

色谱柱:月旭Xtimate® sugar-Ca(7.8×300mm,8μm)。

流动相:纯水;

检测器:RID;

温度:柱温75℃,检测器40℃;

流速:0.2ml/min;

进样量:10μL。

色谱图



微信截图_20211209105600.png


4

示差折光检测器的使用注意事项

微信截图_20211209105644.png

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示差折光检测器主要受温度、流速以及流动相的种类等因素的影响,应设法控制以上几个因素,稳定性会大有改善。


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流动相一定要混匀,而且要充分脱气,用单元泵。

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有条件的话将溶剂瓶、柱温箱、检测器的光学单元温度控制在同一个温度,且高于室温5~10℃。不要将检测器放置在通风橱或是空调出风口处。

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环境温度不要变化太大,实验室门窗关闭,如果没有柱温箱那就把检测器温度调低一点。

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把废液瓶和溶剂瓶放在示差检测器与泵以上位置,这样可以使样品池略有压力,有助于优化检测器性能。

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在安装示差检测器时,由于其流通池的耐压比较低,所以示差检测器在流路系统里必须放在最后。如果还要在系统里增加一个检测器,必须放在示差检测器的前面,以防压力增大时损坏示差检测器的流通池。

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同时建议在运输或搬运示差检测器到其他场所时,流通池里装有异丙醇, 这是为避免在周围环境温度降低时使流通池破裂。

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示差折光检测器参数

流量范围:1~5mL/min;

流通池容量:8μL;

检测范围:0.25~512μ RIU;

线性范围:600μ RIU;

漂移:0.2μ RIU/h;

噪声:2.5 nRIU;

通讯端口:RS232C;

接触液体的材料:316SS,Teflon,Glass;

操作条件:10~35℃,10~80%RH。

月旭科技示差折光检测器(订货号5000.0440)可兼容众多品牌液相色谱仪,是您通用分析的不er选择。



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